SC∕T 7224-2017 鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）检测方法(水产)
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9 |
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日期： |
2021-12-23 |
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ICS 65.020.30,B 41,←:才叫,中华人民共和国水产行业标准,SC/T 7224一2017,鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增,(RT-LAMP) 检测方法,Detection method by reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,for spring viraemia of carp virus,2017 -06-12 发布2017 -10-01 实施,中华人民共和国农业部发布,SC/T 7224-2017,目。吕,本标准按照GB/ T 1. 1-2009 给出的规则起草,请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任,本标准由农业部渔业温政管理局提出,本标准由全国水产标准化技术委员会( SAC/ TC 156) 归口,本标准起草单位:全国水产技术推广总站、深圳市检验检疫科学研究院、深圳出入境检验检疫局、暨,南大学食品安全与研究院,本标准主要起草人: 郑晓聪、贾鹏、李清、王津津、余卫忠、何俊强、于力、刘莹、兰文升、史秀杰、刘盔、,秦智锋、石磊,I,SC/T 7224-2017,鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增(RT 一LAMP) 检测方法,1 范围,本标准给出了鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增CRT - LAMP) 检测的技术原理，规定了试,剂和材料、器材和设备、操作步骤及结果判断,本标准适用于鲤春病毒血症病毒的初筛检测,2 规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件,GB/ T 6682 分析实验室用水规格和试验方法,GB/ T 15805. 5 鱼类检疫方法第5 部分:鲤春病毒血症病毒CSVCV),GB/ T 18088 出入境动物检疫采样,SC/ T 7103 水生动物产地检疫采样技术规范,3 缩略语,下列缩略语适用于本文件,AMV 酶:AMV 逆转录酶Cavian myelobastosis virus reverse transcriptase),Bst 酶:Bst DNA 聚合酶(大片段) [Bst DNA PolymeraseClarge fragment) ],DEPC: 焦碳酸二乙醋Cdiethyl pyrocarbonate),dNTP: 脱氧核昔三磷酸C deoxyribonucleoside triphosphate),EDTA: 乙二股四乙酸C ethlenediamine tetraacetic acid),PBS: 磷酸盐缓冲溶液Cphosphate buffer saline),RT - LAMP: 逆转录环介导等温扩增C reverse transcription loop-mediated isothermal amplification),SVCV: 鲤春病毒血症病毒Cspring viraemia of carp virus),4 技术原理,本标准根据SVCVC参见附录A 中A.1)基质蛋白基因，设计了4 条引物(参见附录B) 特异性识别,基因组中的6 个区域。在AMV 酶和链置换Bst 酶的作用下， 63 0C 恒温扩增60min ，即可实现SVCV 核,酸扩增。而后，在扩增反应后加入显色液，即可通过观察颜色变化判定结果,5 试剂和材料,5. 1 水:符合GB/ T 6682 中一级水的规格,5.2 DEPC 水:配制方法见附录C 中C. 1 或购买商品化试剂,5. 3 磷酸盐缓冲液CPB曰:配制方法见C. 2 或购买商品化试剂,5. 4 Trizol 试剂:商品化试剂， 4 0C 保存,5. 5 三氯甲皖:分析纯，避光常温保存,5. 6 异丙醇:分析纯，使用前预冷至一20 0C ,l,SC/T 7224-2017,5. 7 引物:,SVCV - FIP : 5'- CGCTTGTTCCT AGAACCTTTGT AA TTTTTCCCTTGAAGACGA TGTCAG -,3' ， 40μmol/ L 备用;,SVCV - BIP: 5' - TACAGATTGATCATGTTCCGTTGTGTTTTTGGAATACAAGGCCGACC -,3' ， 40μmol/ L 备用;,SVCV - F3 : 5'- GGAT ATACAA TTGGACACC - 3' ， 10μmo l/ L 备用;,SVCV 一B3 : 5' - ACAACTTCCTTGCACCTT - 3' ， 10μmo l/ L 备用,5.8 10 X ThermoPol 缓冲液: 商品化产品~国国gl lJ Tris - HCl 、0.1 mol/ L 氯化饵、0 .1 mol/ L,硫酸镀、20 mmo l/ L 硫酸臻、1 % T,5.9 dNTPs : 含dATP 、,5. 10 甜菜碱: 浓度5,5. 11,5. 12,5. 13,5. 14,5. 15,5. 16,5. 17,5. 18,5. 19,6. 1,6.2,6.3 无,6. 4 11品,6.5,6. 6,6. 7,6. 8 元菌剪刀、慑子、离心,6.9 消毒设备,7 操作步骤,7. 1 样品采集,7. 1. 1 采样对象,鲤、锦鲤和金鱼等易感鱼类(参见A. 2) ,7. 1.2 采样水温与数量,应在水温13.C ~ 21 .C 间进行， 采样数量应符合SC/T 7103 的要求,7. 1.3 样晶采集,按GB/ T 1……
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